Análisis de genotoxicidad en eritrocitos de tortugas (Phrynops hilarii) de sitios antropizados y naturales de Entre Ríos, Argentina / Analysis of genotoxicity in erithrocytes of turtles (Phrynops hilarii) from anthropized and natural sites of Entre Ríos, Argentina

El test de micronúcleos (MN) es un biomarcador de genotoxicidad no destructivo que permite detectar daño cromosómico y otras alteraciones nucleares (AN). Phrynops hilarii es un quelonio de agua dulce que habita regiones del centro-norte de Argentina. El objetivo principal fue determinar la presencia de MN y otras AN en eritrocitos de poblaciones naturales de P. hilarii comparando sus frecuencias entre tres sitios, dos antropizados y uno de control (ciudades de Diamante y Paraná) de Entre Ríos, Argentina, durante el periodo 2015-2016. Dieciocho individuos (seis por sitio de muestreo) fueron evaluados en los sitios: 1- PD: Parque Nacional Pre-Delta (control), 2- AG: Salto Ander Egg (agroecosistema) y 3- SU: Caleta Club Náutico (sistema urbano). Se extrajo sangre de la vena femoral. Las muestras se tiñeron con el método May Grünwald-Giemsa y se observaron bajo un microscopio con el objetivo de inmersión. Las frecuencias de micronúcleos (FMN) y alteraciones nucleares (FAN) se determinaron cada 1000 eritrocitos observados. Se encontró diferencia significativa (p<0,05) entre el sitio PD y los otros sitios (AG y SU), tanto para FMN (p=0,0021) como para FAN (p=0,0011). Los valores de las frecuencias más altos correspondieron al sitio AG (FMN: 3,33±0,62; FAN: 4,67±0,56). Finalmente, el biomonitoreo con P. hilarii fue útil, por lo que podría considerarse como especie bioindicadora para evaluar la calidad de los ambientes de Argentina.

The micronucleus test (MN) is a biomarker of non-destructive genotoxicity that allows chromosomal damage and other nuclear alterations (NA) to be detected. Phrynops hilarii is a freshwater chelonium that inhabits regions of central-northern Argentina. The main objective was to determine the presence of MN and other NA in erythrocytes of natural populations of P. hilarii comparing their frequencies between three sites, two anthropized and one of control (cities of Diamante and Paraná) of Entre Ríos, Argentina, during the period 2015-2016. Eighteen individuals (six per sampling site) were evaluated at the sites: 1- PD: Pre-Delta National Park (control), 2- AG: Salto Ander Egg (agroecosystem) and 3- SU: Caleta Club Náutico (urban system). Blood was obtained from the femoral vein. The samples were stained with the May Grünwald-Giemsa method and observed under a microscope with an immersion objective. Micronucleus (MNF) and nuclear alterations (NAF) frequencies were determined every 1000 erythrocytes observed. A significant difference (p<0.05) was found between the PD site and the other sites (AG and SU), both for MNF (p=0.0021) and for NAF (p=0.0011). The highest frequency values corresponded to the AG site (MNF: 3.33 ± 0.62; NAF: 4.67 ± 0.56). Finally, biomonitoring with P. hilarii was useful, so it could be considered as a bioindicator species to assess the quality of Argentina's environments.

Estudio genotóxico de una bebida experimental de quinua, kiwicha y kañiwa / Genotoxic study of an experimental drink of quinoa, kiwicha and kañiwa

La evaluación genotóxica de un producto es un paso importante para determinar su viabilidad para consumo humano. Se ha elaborado una bebida experimental a base de pseudocereales de alto valor nutricional como son quinua (Chenopodium quinoa Willd.), kiwicha (Amaranthus caudatus L.) y kañiwa (Chenopodium pallidicaule Aellen), preparada para inducir un posible efecto hipolipemiante en un grupo de personas. El objetivo de este estudio fue evaluar el potencial genotóxico de esta bebida experimental mediante dos pruebas in vitro validadas por agencias internacionales. En la prueba de Ames se utilizaron las cepas TA98 y TA10 de Salmonella typhimurium, con y sin fracción microsomal (S9). Se evaluaron 4 dosis de bebida y además un posible efecto antimutagénico (mismas 4 dosis más mutágeno). Para la prueba de micronúcleos se usó cultivos de linfocitos con células binucleadas, en presencia de cinco dosis de la bebida. Ambas pruebas indican que la bebida estudiada en sus distintas dosis, no presenta efecto genotóxico. Sin embargo, en la evaluación del posible efecto protector de la bebida, se evidenciaría que por el contrario, se potencia el efecto mutagénico de los mutágenos empleados para cada cepa. Por lo tanto, es importante que esta bebida experimental sea sometida a pruebas adicionales in vitro e in vivo para evaluar el potencial genotóxico antes de su consumo.

Efeitos quimiopreventivo e antimutagênico in vivo do extrato hidroetanólico de frutos de Carica papaya L. / Chemopreventive and antimutagenic potential in vivo of hydroethanolic fruit extract of Carica papaya L. / Efectos quimiopreventivos y antimutagénicos in vivo del extracto hidroetanólico de frutos de Carica papaya L.

Introdução: os frutos de Carica papaya L. são amplamente consumidos em todo o mundo e no Brasil, porém pouco se sabe sobre seu efeito citotóxico, antimutagênico e quimioprotetor. Objetivos: avaliar o potencial antimutagênico e quimiprotetor de frutos de Carica papaya e quantificar as suas substâncias fenólicas. Métodos: a atividade antimutagênica foi avaliada pelo método de micronúcleo e as substâncias fenólicas foram analisadas pelo método de Folin-Ciacalteau (fenólicos totais), e pelo método colorimétrico cloreto de alumínio (flavonóides totais). Resultados: o extrato hidroetanólico de frutos de Carica papaya possui potencial antimutagênico e quimioprotetor (370 mg/100 g peso corporal). O teor de substâncias fenólicas do extrato hidroetanólico de frutos foi inferior a 0,001 µg/mg. Conclusão: o efeito antimutagênico e quimioprotetor observado nos extratos dos frutos de Carica papaya pode estar associado a outras substâncias. Estudos químicos precisam ser conduzidos para identificar as substâncias envolvidas na atividade.

Introduction: the fruits of Carica papaya L. are widely consumed around the world and in Brazil, but little is known about its cytotoxic, antimutagenic and chemoprotector effects. Objectives: to evaluate the antimutagenic and chemoprotector potential of fruits of Carica papaya and quantify the phenolic substances present in those fruits. Methods: mutagenic activity was evaluated by micronucleus assay and phenolic substances were analyzed by the Folin-Ciacalteau method (total phenolics), and by aluminum chloride colorimetric method (total flavonoids). Results: the hidroetanolic extract of fruits of Carica papaya elicited antimutagenic and chemoprotector effects (370 mg/100 g body weight). The content of phenolic substances of hidroetanolic extract of fruits was lower than 0.001 µg/mg. Conclusions: the antimutagenic and chemoprotector effects observed must be related to other compounds. Chemical studies must be conducted to identify the substances involved in the activity.

Introducción: los frutos de Carica papaya L. son ampliamente consumidos en todo el mundo y en Brasil, pero poco se sabe acerca de su efecto citotóxico, antimutagénico y quimioprotector. Objetivos: evaluar el efecto antimutagénico y quimiprotector de los frutos de Carica papaya y cuantificar las sustancias fenólicas. Métodos: la actividad mutagénica se evaluó por micronúcleos y las sustancias fenólicas se analizaron por el método Folin-Ciacalteau (fenólica), y el método colorimétrico cloruro de aluminio (flavonoides). Resultados: el extracto hidroetanólico de frutas de Carica papaya tiene efecto antimutagénico y quimioprotector (370 mg/100 g de peso corporal). El contenido de sustancias fenólicas de extracto hidroetanólico resultó inferior a 0,001 µg/mg. Conclusión: el efecto antimutagénico y quimioprotector observado en extractos de frutos de Carica papaya puede estar asociado con otras sustancias. Estudios químicos deben llevarse a cabo para identificar las sustancias que intervienen en la actividad.

Genotoxicidad de la furazolidona y la forma libre de su metabolito 3-amino-2-oxazolidona, mediante la prueba de micronúcleos en linfocitos humanos / Genotoxicity of furazolidone and the free form of the metabolite: 3-amino-2-oxazolidone, based on human lymphocytes micronucleus test

The aim of this trial was to assess the genotoxic effects of the main metabolite of furazolidone (3-amino-2-oxazolidone-AOZ), which is usually protein-bound (PB-AOZ). Because PB-AOZ is not available as a tool for biomedical research, the synthetic free form of AOZ (F-AOZ) was used to challenge human lymphocytes in the genotoxic quantification test of induced micronuclei on human lymphocytes. The level of exposure of lymphocytes to F-AOZ was calculated by determining the residual quantity of the Bg-AOZ (from liver and muscle) by HPLC, derived from broilers fed furazolidone included at 0.11% and 0.22% in feed, and allowing a seven day withdrawal time. Then F-AOZ and furazolidone as positive genotoxic group were added at various concentrations higher than the residual level indication to the in vitro preparations diluted both in dimethyl sulfoxide (DMSO) as follows: for furazolidone (FZD) groups of 10 μM (225 mg/g), 1.0 μM (225 mg/g), 0.1 μM (22.5 mg/g), and 0.001 μM (0.225 mg/g), as well as a negative control group and positive control with DMSO 10-3 M (0.130 mg/g) and arsenic 10-3 M (0.747 mg/g), respectively; for F-AOZ 0.01 μM (1.020 mg/g); 0.102 μM; 0.0005 μM (0.051 mg/g); and 0.0001 μM (0.001 mg/g) were tested, having the same controls groups as for FZD. Results show that furazolidone from 10.0 μM through 0.1 μM possesses a well defined genotoxic effect. Association frequency, relative risk and ANOVA test showed a statistically significant effect vs the negative control group (P = 0.001; P = 0.03 and P = 0.04, respectively). For F-AOZ the same statistical tests showed that only 0.01 μM was capable of inducing a genotoxic effect. These results suggest that furazolidone as parent compound is potentially capable of inducing genotoxicity in consumers. In contrast, only the highest concentration of F-AOZ was shown to induce a similar effect. Yet this concentration is well above the expected residual concentration after a 7-day withdrawal period. These results do not support the use of furazolidone in humans as it is now accepted and reveals that F-AOZ is a considerably lower hazard to public health than the parent compound. Yet, lack of evidence of the effect of bound-AOZ in a similar setting precludes further comparisons, but these results suggest that it seems unlikely that PB-AOZ is a real risk to public health. Further studies are warranted.

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos genotóxicos del metabolito principal de la furazolidona 3-amino-2-oxazolidona (AOZ) que usualmente se encuentra unido a la proteína (AOZ-UP). Debido a que no se dispone para investigación biomédica de AOZ-UP, se utilizó la forma libre de AOZ (AOZ-L) como desafío genotóxico por medio de la técnica de cuantificación de micronúcleos inducidos en linfocitos humanos. El nivel de exposición de linfocitos a AOZ-libre fue establecido con base en la determinación por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) de los residuos de AOZ-UP encontrados en músculo e hígado de pollos, producidos en forma comercial, expuestos a furazolidona (FZD) por medio del alimento a dosis de 0.11% y 0.22%, permitiendo un tiempo de retiro de 7 días. Se conformaron dos grupos furazolidona (FZD) con las siguientes concentraciones de 10 μM (225 mg/g), 1 μM (225 mg/g), 0.1 μM (22.5 mg/g), y 0.001 μM (0.225 mg/g), así como el grupo testigo negativo sulfoxido de dimetilo (DMSO) 10-3 μM (0.130 mg/g) y el testigo positivo arsénico 10-3 μM (0.747 mg/g). Para AOZ-libre las concentraciones fueron 0.01 μM (1.020 mg/g); 0.001 μM (0.102 mg/g); 0.0005 μM (0.051 mg/g); y 0.0001 μM (0.001 mg/g) con los mismos grupos testigo. Los resultados muestran que la furazolidona a concentraciones de 1.0 μM y 0.1 μM posee un efecto genotóxico bien definido. El grado de asociación se calculó por medio del riesgo relativo y prueba de ANDEVA, que mostró el efecto estadísticamente significativo al compararlo con el grupo testigo negativo (P = 0.001; P = 0.03 y P = 0.04, respectivamente). Para AOZ-L las mismas pruebas estadísticas mostraron que sólo la concentración 0.01 μM era capaz de inducir un efecto genotóxico. Estos resultados sugieren que la furazolidona como sal pura es potencialmente capaz de inducir efectos genotóxicos en humanos, en los que no se apoya su uso. En contraste, sólo la concentración más alta de AOZ-L mostró un efecto similar, pero dicha concentración es mayor que la encontrada como residual a los siete días de retiro y puede considerársele como un peligro mucho menor para la salud pública que el compuesto progenitor. Dada la falta de evidencia científica del efecto genotóxico del AOZ-UP no se pueden realizar comparaciones adicionales con lo obtenido aquí para AOZ-L, pero parecería poco probable calificar a los residuos de AOZ-UP como peligros reales para la salud pública, por lo que se requieren pruebas adicionales.